O Laboratório de Controle Genético do CEMIB monitora o padrão genético de suas linhagens por meio da análise do polimorfismo de microsatélites, marcadores moleculares genômicos que são amplificados pela reação de PCR (Polimerase Chain Reaction).
No início da década de 90 esta metodologia passou a ser empregada, em substituição a procedimentos que vinham sendo utilizados rotineiramente em Instituições de todo o mundo. As principais razões para a rápida disseminação deste método foram, além de sua acuidade, a otimização das rotinas com significativo ganho de tempo e redução de custo.
A aplicação deste método em nosso laboratório teve início em 1996, por meio de intercâmbio de Pesquisadores do Laboratório de Certificação Genética do Centro, com profissionais do Instituto Pasteur de Paris (França) e do Zentralinsitut für Versuchtierzucht da Alemanha (Hannover), ambas Instituições de excelência na avaliação genética de animais de laboratório e perdura até os dias atuais. Através destas análises o laboratório de controle genético certifica geneticamente colônias do CEMIB e de outras Instituições do Brasil e da América Latina.
Mesmo sendo a PCR de microsatélites utilizada como padrão para monitoramento genético de linhagens animais em todo o mundo, o CEMIB pretende dar um passo adiante nos próximos anos, seguindo exemplo de grandes Centros de Bioterismo do mundo, envidando esforços no sentido de introduzir de forma rotineira, uma nova metodologia que permitirá não apenas rastrear as matrizes fornecidas para outros Centros, mas também, devido à sua maior capacidade de resolução, monitorar novas linhagens, como as transgênicas, knockouts e aquelas originadas a partir de mutações que podem se constituir em modelos para novas doenças.
Trata-se da implantação das técnicas de SNP (Single Nucleotide Polimorfism) e Q-PCR. Inicialmente o SNP será introduzido em rotina por se tratar de um protocolo condizente com a infra-estrutura atual. Nesta técnica, o polimorfismo genético presente em apenas um nucleotídeo encontrado numa seqüência específica de DNA pode ser identificado, ampliando significativamente o poder de investigação do genoma dos animais.
Apenas como comparação, enquanto com o uso de microsatélites um polimorfismo pode estar presente a cada 5cM de distância, em uma outra técnica de maior resolução (SSLP) esta distancia pode cair para cerca de 30Kb (kilobases). Já entre os marcadores SNP, esta distância é de aproximadamente 700pb (pares de bases), o que torna o SNP um marcador de altíssima resolução, possibilitando maior capacidade para certificar linhagens e esclarecimento de mutações pontuais espontâneas ou induzidas.
A metodologia de SNP se baseia em técnicas de seqüenciamento de DNA. O método surgiu no início do século 21 e graças ao seqüenciamento completo do genoma do camundongo C57/BL6 em 2002, foi possível um grande avanço nesta técnica. Atualmente existem mais de 7000 marcadores de SNP para diferentes linhagens. Estes aspectos têm contribuído para que o monitoramento genético que atualmente emprega marcadores de microssatálites migre paulatinamente para a análise de SNPs.
Outra metodologia que poderá, em um futuro próximo, auxiliar o monitoramento genético de animais de laboratório é o PCR quantitativo (Q-PCR). Por este método as alterações são avaliadas também em nível de expressão e não apenas na seqüência genômica. Algumas linhagens têm características fenotípicas que podem variar dentro da população e que podem ser rastreadas através de análise de nível diferencial de transcrição do RNA mensageiro (mRNA). Esta metodologia se baseia em produzir um DNA complementar (cDNA) ao mRNA e usar este com molde para uma amplificação em PCR, que será analisada em tempo real. A análise dos dados ocorre durante a fase logarítmica da reação de amplificação da PCR. Esta metodologia pode ajudar como ferramenta para identificação da linhagem, como auxiliar na seleção dos melhores reprodutores para a produção da colônia.
Criopreservação - Banco de Embriões de Murinos
Reprodução Assistida